Главная


Смотрите обложка на транспортную карту интернет магазин на нашем сайте.

Модификации метода

Система, о которой шла речь выше, позволяет наблюдать первичный иммунный ответ in vitro даже в том случае, когда в качестве антигена используются не цельные эритроциты, а соответствующий лизат. Она также может использоваться для наблюдения за индуцированным in vivo иммунным ответом, например, с ее помощью можно оценивать in vitro вторичный иммунный ответ на эритроциты барана. Следует помнить, что первичное образование антител к ЭБ возможно при использовании клеток селезенки кролика, но не крысы.

Иногда первичную индукцию антителообразования удается получать при использовании динитрофенол-фиколла (ДНФ-фиколл) и липополисахарид O127; о появлении антител в этом случае можно судить по реакции локального гемолиза (см. раздел "Метод локального гемолиза"). Сыворотку плода коровы заменяют иногда человеческой плацентарной сывороткой или подходящей донорской сывороткой. Можно использовать как пластиковые чашки Петри, так и стеклянные. Покачивание культур при инкубации практически не влияет на уровень антителообразования.

Ежедневное подкармливание культур клеток в соответствии с оригинальным методом, хотя и увеличивает число антителообразующих клеток, все же не оказывает заметного влияния на качественные результаты опыта. Такая модификация повышает стоимость исследования и задерживает проведение по времени эксперимента, особенно если не обеспечено «подкармливание» культур в конце недели.

При соблюдении соответствующих условий вместо чашек Петри можно использовать планшеты для микротитрования с плоским дном, например фирмы Nunc, Дания. В каждую лунку вносят 3х108 спленоцитов в 0,3 мл культуральной среды, стимулируют их динитрофенол-фиколлом и эритроцитами барана; образование АОК при этом вполне сопоставимо с тем, которое наблюдается на стеклянных чашках Петри, в расчете на 106 жизнеспособных клеток.

Имеются предварительные данные об индукции первичного иммунного ответа у лимфоцитов из миндалин и крови человека. От 23 здоровых доноров были выделены лимфоциты и моноциты центрифугированием в градиенте плотности. В 13 случаях наблюдали стимуляцию под влиянием ДНФ-фиколла, ЭБ и конъюгированных с тринитрофенильной группой (ТНФ) ЭБ.

Показать образования антител в культуре клеток человека можно, удлиняя время культивирования до 7 дней и увеличивая продолжительность воздействия конплемента в реакциях прямого и непрямого локального гемолиза до 2 часов. Зоны гемолиза, образуемые АОК человека, имеют меньший диаметр, чем зоны, образованные аналогичными клетками мыши. Выход АОК из клеток донорской крови можно увеличить, добавляя к культуральной среде кон-А (1 мкг/мл) либо добавляя автологичную и АВ-сыворотку вместо сыворотки плода коровы, либо снижая содержание моноцитов путем одночасовой адгезии на стекле полученных центрифугированием в градиенте плотности форменных элементов крови. Лимфоциты из миндалин выделяют точно так же, как и клетки селезенки мыши. При культивировании клеток из миндалин необходимо добавлять нистатин (Sqibb, Англия) в количестве 20 ЕД/мл.